Problemi fiż-Żamma tal-Vijabilità taċ-Ċelloli Fis-Sistema ta 'Immaġini taċ-Ċelloli Ħajjin Waqt l-Immaġini
Ħalli messaġġ
L-immaġni taċ-ċelluli ħajjin hija għodda analitika importanti fil-laboratorji li jistudjaw id-dixxiplini tar-riċerka bijomedika, bħall-bijoloġija taċ-ċelluli, newrobijoloġija, farmakoloġija u bijoloġija tal-iżvilupp. L-immaġini ta 'ċelluli u tessuti fissi (li għalihom photobleaching huwa l-kwistjoni ewlenija) ġeneralment teħtieġ intensità għolja ta' illuminazzjoni u ħin twil ta 'espożizzjoni; madankollu, dawn għandhom jiġu evitati meta jkunu qed isiru l-immaġini taċ-ċelloli ħajjin. Il-mikroskopija taċ-ċelluli ħajjin normalment tinvolvi kompromess bejn il-kisba tal-kwalità tal-immaġni u ż-żamma ta 'ċelloli b'saħħithom. Għalhekk, biex tiġi evitata intensità ta 'illuminazzjoni għolja u ħin ta' espożizzjoni twil, ir-riżoluzzjonijiet spazjali u temporali ħafna drabi huma limitati f'esperiment. L-immaġini taċ-ċelloli ħajjin jinvolvi firxa wiesgħa ta 'metodi ta' immaġini mtejba b'kuntrast għall-mikroskopija ottika. Ħafna mill-investigazzjonijiet jużaw wieħed mill-ħafna tipi ta 'mikroskopija fluworexxenti, u dan ħafna drabi huwa kkombinat ma' tekniki ta 'dawl trażmess, li se jiġu diskussi hawn taħt. Avvanzi kontinwi fit-tekniki ta 'l-immaġini u d-disinn ta' sondi fluworexxenti jtejbu l-qawwa ta 'dan l-approċċ, u jiżguraw li l-immaġni ta' ċelluli ħajjin se tkompli tkun għodda importanti fil-bijoloġija.
Attenzjoni importanti hija li jiġi żgurat li ċ-ċelloli jkunu f'kundizzjoni tajba u jiffunzjonaw b'mod normali waqt li jkunu fuq l-istadju tal-mikroskopju b'illuminazzjoni fil-preżenza ta 'fluworofori sintetiċi jew proteini fluworexxenti. Il-kundizzjonijiet li fihom iċ-ċelloli jinżammu fuq l-istadju tal-mikroskopju, għalkemm varjabbli ħafna, ħafna drabi jiddettaw is-suċċess jew il-falliment ta 'esperiment.
Diversi midja tal-kultura taċ-ċelluli huma disponibbli bbażati fuq ir-rekwiżiti bijokimiċi partikolari taċ-ċelloli. Il-midja tal-kultura fihom diversi kostitwenti, inklużi aċidi amminiċi, vitamini, melħ inorganiku (minerali), oligoelementi, kostitwenti tal-aċidu nuklejku (bażijiet u nukleosidi), zokkor, intermedji taċ-ċiklu tal-aċidu trikarbosiliku, lipidi u ko-enzimi. Fil-midja tal-kultura tat-tessuti, pass importanti huwa li tikkontrolla l-konċentrazzjoni tal-ossiġnu, il-pH, il-kapaċità tal-buffering, l-osmolarità, il-viskożità u t-tensjoni tal-wiċċ. Formulazzjonijiet tal-midja disponibbli kummerċjalment spiss jinkludu żebgħa indikatur (eż., aħmar fenol) biex jiddetermina viżwalment il-valur approssimattiv tal-pH. Sistema buffer tad-dijossidu tal-karbonju u tal-bikarbonat għar-regolazzjoni tal-pH hija meħtieġa għal kważi l-linji taċ-ċelluli kollha. Iċ-ċelloli jeħtieġ li jiġu kkultivati f'atmosfera li fiha ammont żgħir ta 'dijossidu tal-karbonju (ġeneralment 5-7%) f'inkubaturi biex jikkontrollaw il-konċentrazzjoni tal-gass maħlul. Għal immaġini ta 'ċelluli ħajjin, atmosfera xierqa bid-dijossidu tal-karbonju tista' tkun diffiċli biex tiġi pprovduta, u dan normalment jeħtieġ kmamar tal-kultura ddisinjati speċifikament għal atmosfera regolata. Ir-rekwiżiti tal-ossiġnu jistgħu jvarjaw fost il-linji taċ-ċelluli, iżda l-livelli normali tat-tensjoni tal-ossiġnu atmosferiku huma adattati għall-biċċa l-kbira tal-kulturi. Fir-rigward tal-osmolarità, ħafna mill-linji taċ-ċelluli għandhom tolleranza kbira għall-pressjoni osmotika, bi tkabbir tajjeb f'osmolaritajiet bejn 260 u 320 milliosmolar. Meta ċ-ċelloli jitkabbru f'kulturi ta 'pjanċa miftuħa jew dixxijiet Petri, medju ipotoniku jista' jintuża biex ilaħħaq mal-evaporazzjoni.
